「DIFF+」抗流感
01前 言
从1918年到现在，人类与流感的斗争经历了100多年，根据世界卫生组织（WHO）发布的《2019~2030年全球流感策略报告》，在爆发性流行时，流感可在全世界迅速传播，可影响总人口的10%～20%。即使在非爆发性流行的年份，全球每年季节性流感也会造成约300-500万重症病例和29-65万死亡病例。
对抗流感病毒，我们需要依靠口服药物与疫苗通力合作。目前，我国正处于流感流行期。据数据显示，近三年来我国流感药物销售额在不断上升，2023年上半年我国流感药物销售额约为36.82亿元。流感病例每年仍在激增，预计将推动抗流感药物市场的持续增长。流感疫苗是全球疫苗产业界的重磅品种，市场空间巨大，而国内流感疫苗渗透率低，与发达国家仍有巨大差距。截至 2020 年，国内流感疫苗批签发总量 5765万剂次，若按照2020 年末全国总人口 141212 万人来计算，即便当年签发的疫苗实现全部接种，全人群接种率也仅有 4.08%。
根据作用机制，抗流感病毒药物主要分为神经氨酸酶抑制剂（奥司他韦、帕拉米韦、扎那米韦）、血凝素抑制剂（阿比多尔）和RNA聚合酶抑制剂（玛巴洛沙韦、法维拉韦）三大类。
抗流感病毒药物研发靶点及代表药物
source: Mark von Itzstein, Nature Reviews Drug Discovery, 2007
抗病毒药物研发面临挑战
目前常用抗流感药物治疗时间窗相对较窄，例如奥司他韦必须在流感病毒感染后48小时内开始服用才能达到最佳疗效。这种时间限制对新药的研发构成了挑战：开发的新药不仅需要在病毒复制高峰期快速有效地抑制病毒，还要能在病程中较晚阶段显示出疗效，以覆盖错过初始治疗窗口的患者。因此，研究者需要寻找或设计能够在更宽治疗窗口内有效并且安全的药物，这增加了药物开发的复杂性和成本。
同时，流感病毒易发生耐药突变也给新药研发带来挑战。奥司他韦和扎那米韦等神经氨酸酶抑制剂大规模使用或滥用引起的耐药现象逐渐增多，核酸内切酶抑制剂巴洛沙韦在临床III期实验中病毒也迅速发生耐药。目前针对流感病毒耐药性，尚无有效的解决方法。
此外，现有上市药物对流感重症患者的治疗效果相对有限。因此，急需研发新型抗流感病毒药物来满足临床治疗流感患者的迫切需求。
「DIFF+」抗流感
02
迪福润丝生物抗病毒药物临床前评价平台——筛选及药效评价
迪福润丝生物的临床前CRO药物研究平台，涵盖针对不同类型的流感病毒的体内外药效评价。可进行聚合酶活性检测（Minigenome RNP），利用随机突变病毒库技术，可提前预测耐药位点，为药物研发指明方向。
「DIFF+」抗流感
03迪福润丝生物疫苗开发服务平台——安全性、稳定性、有效性评价 & 毒株开发
迪福润丝生物的流感疫苗开发服务，涵盖针对不同类型的流感候选疫苗的体内外安全性评价、疫苗免疫原性及攻毒保护效率评价等一体化服务。
「DIFF+」抗流感
04服务核心优势
- Bio Database毒株资源优势：
- Tech Database技术资源优势: 迪福润丝生物拥有成熟的反向遗传操作技术平台，拥有行业领先的技术优势：
流感病毒报告病毒系统：
通过病毒反向遗传操作技术，迪福润丝将报告基因插入到流感病毒基因组中。这种先进的技术为研究人员提供了一种高效、直观且可靠的工具。通过流感报告病毒，我们可以在体内外实验中高效且直观地观察病毒的动态感染过程。通过检测报告蛋白的表达水平定量分析病毒的复制情况，从而评价抗病毒药物的效果。
聚合酶活性检测（Minigenome RNP）：
通过聚合酶活性检测，我们可以在实验室中重建流感病毒的基因复制和转录过程，从而评估流感病毒聚合酶的活性和功能。在抗病毒药物的筛选中发挥重要作用，研究人员可以利用这项技术评估不同抗病毒药物对流感病毒聚合酶活性的影响，从而为药物研发提供重要参考。
构建耐药株 预测耐药位点（随机突变病毒库技术）：
迪福润丝生物拥有构建耐药株和预测耐药位点的先进技术——随机突变病毒库技术。这项技术的核心是通过引入随机突变来生成大规模的病毒变异库，然后利用筛选或测序等方法来识别具有耐药性的突变体。通过随机突变病毒库技术，我们能够生成大量的病毒变异体，从而有效地研究耐药性的发生机制，并为抗病毒药物的开发提供重要的参考和指导。
复制缺陷型流感病毒（Defective Interfering Influenza Virus Particles，DIIVPs）：
在研究高致病性禽流感病毒时，由于其高度致病性和传播性，直接使用完整的病毒进行实验可能存在安全风险，因此使用DIIVPs成为一种替代方法。迪福研发通过成熟反向遗传平台，通过缺失病毒致病基因构建缺陷型病毒，使得病毒在感染宿主细胞后无法完全复制，从而减轻了实验操作中的风险。DIIVPs为研究高致病性禽流感病毒提供了一种安全有效的研究工具，可以用于评估疫苗和抗病毒药物在细胞水平的有效性，为科学家在普通环境下进行流感病毒相关研究提供了可能。
VSV-流感假病毒（VSV-FLU）：
水泡性口炎病毒（Vesicular Stomatitis Virus，VSV）载体的流感假病毒是另一种用于研究流感病毒的工具。它是通过将VSV的囊膜蛋白替换为流感病毒的囊膜蛋白来构建的，从而使VSV变成了一种能够携带流感病毒基因组的假病毒。通过结合使用VSV-FLU假病毒和DIIVPs假病毒，研究人员可以对高致病性禽流感的各个靶点进行全面评价。VSV载体的流感假病毒是一种安全且高效的工具，为开发新型疫苗和抗病毒药物提供了重要支持。
「DIFF+」抗流感
05案例分享
1. 报告病毒
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荧光报告病毒-细胞水平
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Diff构建的流感荧光报告病毒感染细胞后可以产生很强的荧光信号，说明病毒在细胞内可以正常复制和表达GFP；
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Diff构建的流感荧光报告病毒可以形成空斑，具有与WT病毒有相同功能。
报告病毒活体成像
利用MA-PR8-NanoLuc对抗病毒药物进行体内评价
2. 小鼠适应株-药效评价
目前小鼠已被广泛用于研究发病机制、病毒复制、宿主免疫反应以及抗病毒药物和疫苗的效力。感染非适应性人类流感病毒的小鼠一般不会出现典型的人类流感症状，如发热和呼吸道症状(打喷嚏、流鼻涕、咳嗽等)；一些高致病性禽流感病毒可以在小鼠体内引起疾病，小鼠感染流感的临床症状包括弓背、被毛凌乱、食欲不振、体重减轻、神经症状(后肢麻痹)和死亡。
参考文献
1. von Itzstein, M. The war against influenza: discovery and development of sialidase inhibitors. Nat Rev Drug Discov 6, 967–974 (2007).
卓越的服务体验
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