小鼠品系：ICR杂交小鼠
小鼠日龄：成年鼠18周
操作流程：
1． 6孔板包被。每孔加入1ml collagen gel，常温静置10min, 转移多余液体，培养板风干1h，待板子风干后立即使用或4度保存。使用前基础培养基清洗一次。
2． 培养基及灌流液的配制。
(1) 完全培养基配方：DMEM/F12基础培养基分别40ml,根据需要分别配置含全因子和单个因子的培养基。
Insulin、、Dexamethasone、、Selenium、、Transferrin、Human EGF、Penicillin、Streptomycin、FBS：10%
(2) 灌流液配方：
前灌流液：含0.02%EGTA，无Ca2+，Mg2+的DPBS
缓冲液：含钙的HBSS
后灌流液：含0.05%Ⅳ型胶原酶的HBSS（含Ca2+，Mg2+）
(3)基础培养基
DMEM +2% FBS作为清洗液
3． 小鼠腹腔注射0。2%***1ml，待小鼠进入深度麻醉状态后（5-10分钟）迅速将其固定于解剖板上，于超净台中解剖，暴露肝脏。
4． 沿门静脉插管固定(1min左右)，灌流前灌流液，流速5ml/min，待肝脏完全膨胀，剪断下腔静脉。灌流时间6分钟。
5． 前灌流液灌流结束后，灌流中间缓冲液，流速5ml/min，时间6分钟。（中间换液时间20s以内）。
6． 继续灌流后灌流液，流速5ml/min，时间6分钟。（中间换液时间20s以内）。
7． 取下肝脏，置于平皿中，剪碎，加入20ml的基础培养基（DMEM+2%FBS），轻轻吹打，先后过滤80目、200目细胞筛，收集滤液。该步骤5min内操作完成。
8． 收集沉淀，500rpm，离心3min。（取一部分常温静置20min，去上清，直接接种）
9． 去上清，加入20ml基础培养基重悬细胞，500rpm，离心3min，重复该步骤一次。
10．收集沉淀，加入3ml含血清的完全培养基重悬细胞，台盼蓝染色计数，分别以6×105/孔转移细胞入6孔细胞培养板生长。